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Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • 권장하는 Sensor chip PrismA 의 regeneration condition은 무엇입니까?
    10mM 글리신-HCl, pH 1.5의 60s, 50mM NaOH의 120s 가 권장되는 조건입니다.

    물론 ligand와 analyte의 상태에 따라 조정이 필요할 수도 있습니다.
  • PrismA 리간드는 Human IgG의 어느 부분에 결합합니까?
    Protein A chip의 경우에는 CH2와 CH3에 binding affinity 가 존재하지만,  PrismA의 경우는 Main binding affinity 는 CH2와 CH3에 있지만 VH3에도 Binding affinity가 있습니다.

    PrismA Human IgG
  • Sensor chip prismA는 어떤 chip일까요?
    Sensor Chip CM5에 PrismA 리간드가 결합된 사전 기능화 된 즉시 사용 가능한 센서 칩입니다.

    PrismA는 유전자 조작 Protein A 리간드로 MabSelect PrismA™ 수지 및 Fibro PrismA 섬유 기반 크로마토그래피 제품에 사용되는 것과 동일한 리간드입니다.

    그렇기 때문에 바이오의약품 공정 개발, 제조 및 품질관리에서 Human IgG 항체 농도 분석 및 yes/no 스크리닝에 사용할 수 있습니다.
  • ÄKTA system의 component volumes은 어떻게 확인이 가능한가요?
    시스템 매뉴얼의 reference information 을 확인하시면 오른쪽 표에 해당내용이 있습니다. 이러한 component volumes은 Delay volume 을 setting 하실때 참고하시면 됩니다.
    component volumes
  • ÄKTA pure 150의 delay volume은 무엇인가요?
    • 보여지는 table의 delay volume는 U9-M을 기준으로 작성이 된 수치입니다.
    • 만약 U9-L을 사용하시는 경우라면, 2mm flow cell의 경우에는 9ul를 5mm flow cell을 사용하는 경우라면 4ul를 추가하시면 됩니다.
    AKTA pure 150 delay volume

    측정이 된 delay volumn을 system 에 적용하는 방법은 아래와 같습니다.

    Control 창에서, System settings  delay volume →monitor to outlet valve or monitor to fraction 선택 → Delay volume 입력 → ok
  • UV의 ghost peak이 주기적인 pattern으로 나타납니다. 어떻게 해결을 해야 하나요?
    Pump head에 air bubble이 존재하면 아래와 같은 패턴의 UV가 나타나게 됩니다. 아래와 같은 두가지로 air bubble를 제거해주시면 됩니다.

    a.Prime the inlets (fill the buffer inlets with liquid)

    b.Purge the pump (remove air from the pump heads)

    UV ghost peak
  • ÄKTA avant의 fraction collector 혹은 F9-C collector에서 cassette type을 인지하지 못하는 error가 발생하는데 어떻게 해결해야 하나요?
    Fraction collector 에는 cassette type을 인지할 수 있는 sensor가 내장되어 있습니다.

    이곳에 다른 이물질에 붙어 있게 되면 제대로 된 cassette를 인지하지 못하기 때문에, 일주일에 한 번은 sensor를 닦아주는 것이 좋습니다.
  • His-tagged 단백질의 회수율이 낮은 경우 어떠한 사항을 고려해야 하나요?
    세포배양배지에 포함되어 있는 많은 components는 IMAC 수지와 호환되지 않기 때문에 단백질 정제의 수율을 낮추게 됩니다.

    이는 샘플을 로딩하는 동안 IMAC 레진에 고정화 되어 있는 metal ions이 스트립핑이 되기 때문에 점점 binding affinity가 약하게 되기 때문입니다.

    이러한 경우는 EDTA에 내구성이 강한 레진, Ni Sepharose excel 제품으로 교체를 하면 해결이 될 수도 있습니다.

    Ni Sepharose
  • 단백질 구조를 보기 위해 단백질 정제를 하려고 합니다. 특히 Cryo-EM으로 분석을 하려고 하는데, AKTA series 중 어떤 모델을 선택을 해야 하나요?
    Cryo-EM 실험을 위해 단백질을 정제할 때의 주요 과제는 ul 정도의 제한된 샘플 볼륨과 단백질의 동일한 질량, 모양 및 크기의 분자로 구성이 되어야 한다는 것입니다. 즉 단백질의 입자가 용액에서 단분산이 되어야 한다는 것입니다.

    이러한 조건에 충족하기 위해서 나온 제품이 AKTA micro 입니다.

    AKTA micro는 AKTA pure에 비해 내부 볼륨을 최소화 하여 해상도를 높이며 적은 볼륨의 샘플도 로딩 및 분획이 가능합니다.

    AKTA micro와 함께 Cryo-EM 에 적합한 고해상도 컬럼은 Superdex™ Increase, Capto™ HiRes 이 있으며, 아래 데이터를 보시면 AKTA pure 와 AKTA micro 의 성능을 비교 하실 수가 있습니다.

    AKTA micro
  • Mammalian cell line에서 유래한 his-tagged 단백질을 정제하려고 합니다. 어떠한 제품을 구매하면 될까요?
    Ni Sepharose Excel은 이러한 Application 에 사용할 수 있는 제품입니다.

    Cell culture 배지에는 일부 EDTA 유사 시약 및 Ni+ 이온을 제거하는 물질들을 포함하고 있는데, Ni Sepharose Excel은 EDTA 및 DTT와 같은 환원제에 대해 매우 높은 내성을 가지고 있습니다.

    따라서 Ni Sepharose Excel을 이용한다면, 금속 이온 스트리핑을 유발하는 물질을 포함한 배지를 제거하지 않고 샘플을 바로 로딩 할 수 있으므로 워크플로우를 크게 단순화 할 수 있습니다.

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