fbpx
Cytiva는 치료제의 개발 및 제조를 촉진하고 가속화합니다.카톡 1:1 문의뉴스레터 구독

Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • [NEW] ÄKTA를 사용하지 않을 경우 어떻게 보관해야 할까요?
    아래 기간에 따른 ÄKTA 보관 방법을 참고하시기 바랍니다.

    <3일 이내 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • 아래의 Flow path를 모두 DW로 Washing (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • ÄKTA는 “Pause” 가 아니라 “End” 상태로 보관
    • ÄKTA와 UNICORN software는 shut down 할 필요는 없음
    <3일 이상 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • pump rinse solution을 fresh 20% EtOH로 교체
    • 미지근한 DW로 장비 전체를 Washing (manually or system wash) (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • 장비 전체를 fresh 20% EtOH로 채움
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • UNICORN software를 끄고 PC-> ÄKTA system 순서로 Shut down 한다.
  • [NEW] ÄKTA system을 이용해서 천연 물질에서 소수성 단백질을 분리하기 위해 RPC column을 사용하려고 합니다. Fraction collector는 FR-C를 가지고 있는데 주의하여야 할 사항이 있을까요?
    ÄKTA pure 25 크로마토그래피 시스템을 사용하여 역상 크로마토그래피를 수행하려면 따라야 할 몇 가지 중요한 지침이 있습니다.

    1. 유기 용매는 일반적으로 단백질 분리에 사용하는 버퍼 보다 ​​PEEK 튜브 벽을 더 쉽게 약화시킬 수 있습니다. 장기간 동안 높은 압력에서 유기 용매를 사용할 때는 특히 주의를 해야 합니다.

    2. Mixer sealing ring을 유기 용매에 저항성이 높은 제품(제품 코드: 29011326)으로 교체를 해야 합니다.

    3. Pump piston sealing도 변경하는 것이 좋습니다.  사용하는 Acetonitrile 농도 및 압력에 따라 다르지만 piston sealing의 수명을 연장하려면 더 낮은 농도의 Acetonitrile을 사용하고 사용 후에는 즉시 Acetonitrile을 제거해야 합니다.

    4. Fraction collector F9-C를 사용하여 가연성 액체를 분획하면 화재의 위험이 있습니다. 유기 용매를 사용하는 RPC 방법 또는 기타 절차를 실행할 때는 outlet valve 또는 Fraction collector F9-R (제품 코드: 29011362)을 사용하십시오.
  • [NEW] Q-Sepharose FF 컬럼을 장기 보관하려고 하는데 20% 에탄올이 아닌 다른 저장 용매를 찾고 있습니다. Isopropanol을 사용해도 괜찮을까요?
    Q-Sepharose FF에 대한 isopropanol의 장기 보관에 대한 연구가 없기 때문에 권장 드리지 못합니다. 그러나 benzyl alcohol에 대한 호환성은 검증이 된 용매이니 isopropanol이 아닌 benzyl alcohol을 권장 드립니다.

    이외 다른 크로마토그래피 레진에 대한 저장 용매는 각 제품의 Data File을 보면 확인이 가능합니다.
  • [NEW] 5ml Mixer chamber가 있는 ÄKTA Pure 150을 사용하고 있습니다. 직격 7cm의 column을 사용하려고 하는데 15ml Mixer chamber로 교체를 해야 하나요?
    Mixer chamber의 volume은 사용하시는 유속에 따라 다릅니다. 일반적으로 최대 50ml/min의 유속에는 5ml mixer를 사용하며 50ml/min 이상의 유속에서는 15ml mixer를 권장 드립니다. 이는 유속이 빨라짐에 따라 좀 더 정확한 gradient를 만들어 주기 위함입니다.

    따라서 column 에 충진되어 있는 resin에 따라 사용하는 유속을 고려하셔서 선택하시면 좋을 것 같습니다.
  • [NEW] Affinity tag의 종류와 정제 시 고려해야 하는 사항이 있을까요?
    단백질에 affinity tag을 추가하면 정제 및 검출이 비교적 쉬우며, target 단백질의 용해도와 안정성을 향상시킬 수 있습니다.

    Tag 선택 시 고려할 사항은 정제 목적, Tag 크기, 크로마토그래피 resin의 비용 등이 있습니다. 아래 표는 가장 많이 사용되는 4가지 Tag에 대한 주요 특징을 보여줍니다.

    His-tag은 단백질 정제에 일반적으로 가장 많이 사용하는 tag이며, binding capacity가 높은 반면 purity가 낮은 단점이 있습니다. Strep-tag는 purity는 높지만 binding capacity가 낮습니다. GST는 적절한 binding capacity와 purity를 가지고 있습니다.

  • [ÄKTA avant] 사용하는 유속에 따라 장착하는 믹서 챔버의 요량이 다른가요?
    기본으로 장착되어 있는 믹서 챔버는 1.4 ml (Avnat 25)와 5 ml (Avant 150) 입니다. 아래 표에 따라 해당하는 그래디언트 유속에 따라 믹서 챔버를 교체하세요.

    faq-ÄKTA avant
  • [ÄKTA avant] pH 전극을 사용하지 않을 때에도, pH 밸브의 플로우 셀에 삽입 한 채로 있어도 괜찮습니까?
    매일 사용하고 사용하지 않는 기간이 짧은 경우(야간 등)에는 pH 밸브에 연결 한 채로 있어도 괜찮습니다 (미사용시, pH 보정 모드로 전환, 실린지로 pH 플로우 셀 내에 보관용액을 충전해야합니다). 며칠 이상 사용하지 않을 경우는 pH 전극을 플로우 셀에서 분리, 보관용액을 충전 한 부속 보호 커버를 장착하여 저장하는 것이 좋습니다.
  • [ÄKTA avant] 역상 크로마토그래피가 가능한가요?
    가능하지만, fraction collector로의 collection이 불가능합니다. 휘발성 유기 용매가 fraction collector 내에 데미지를 줄 수 있어 분석용으로 사용하시거나 아웃렛 밸브로 collection 하실 수 있습니다.
  • [ÄKTA avant] ÄKTAexplorer과 ÄKTApurifier와 연결할 수있는 fraction collector Frac-950와 오토 샘플러 A-905을 ÄKTA avant에 연결할 수 있나요?
    ÄKTA avant는 Frac-950와 A-905을 연결할 수 없습니다. 오토 샘플러가 필요한 경우 ALIAS™ autosampler 를 사용하세요.
  • [ÄKTA avant] Method마다 딜레이 볼륨 설정을 변경할 필요가 있나요?
    Method에 포함되는 pH 밸브의 유로 정보를 이용하여 자동으로 딜레이 볼륨을 계산합니다. UV flow cell 이후의 배관을 변경했을 때를 제외하고는 딜레이 볼륨 설정을 변경할 필요가 없습니다.

Share This