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Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • [NEW] HPLC보다 AKTA를 사용해서 단백질 정제를 하였을 경우 어떠한 이점이 있을까요?
    ÄKTA 시스템은 다음 단계의 실험 혹은 제품을 위한 대량의 단백질 정제를 위한 장비로 분획을 받기 위한 정제 시스템입니다.

    AKTA는 내염성, 저유량,저압력 크로마토그래피 시스템으로 펌프와 버퍼의 이동경로, 유연성 및 자동화 기능이 단백질 정제에 최적화되어 있습니다. HPLC에서 사용되는 고압 조건은 분석용에 적합하며, 단백질의 구조에 영향을 줄 수도 있습니다.

    이러한 특징으로 인해 AKTA는 단백질 정제에 최적화 되어 있는 시스템입니다.
  • [NEW] 크로마토그램에서 주어진 UV 흡광도로부터 단백질의 농도를 측정할 수 있을까요?
    네. 타겟 단백질의 흡광계수를 알고 있다면, UNICORN 7에서 간단하게 계산 할 수 있습니다.

    Evaluation 창에서 결과 파일을 더블 클릭 하시고 1번을 클릭해서 UV면적을 구합니다.

    그리고 2번의 흡광계수를 입력하시면, 단백질 농도와 함께 양을 확인 하실 수가 있습니다.

    AKTA_UNICORM
  • ÄKTA를 사용하지 않을 경우 어떻게 보관해야 할까요?
    아래 기간에 따른 ÄKTA 보관 방법을 참고하시기 바랍니다.

    <3일 이내 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • 아래의 Flow path를 모두 DW로 Washing (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • ÄKTA는 “Pause” 가 아니라 “End” 상태로 보관
    • ÄKTA와 UNICORN software는 shut down 할 필요는 없음
    <3일 이상 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • pump rinse solution을 fresh 20% EtOH로 교체
    • 미지근한 DW로 장비 전체를 Washing (manually or system wash) (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • 장비 전체를 fresh 20% EtOH로 채움
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • UNICORN software를 끄고 PC-> ÄKTA system 순서로 Shut down 한다.
  • ÄKTA system을 이용해서 천연 물질에서 소수성 단백질을 분리하기 위해 RPC column을 사용하려고 합니다. Fraction collector는 FR-C를 가지고 있는데 주의하여야 할 사항이 있을까요?
    ÄKTA pure 25 크로마토그래피 시스템을 사용하여 역상 크로마토그래피를 수행하려면 따라야 할 몇 가지 중요한 지침이 있습니다.

    1. 유기 용매는 일반적으로 단백질 분리에 사용하는 버퍼 보다 ​​PEEK 튜브 벽을 더 쉽게 약화시킬 수 있습니다. 장기간 동안 높은 압력에서 유기 용매를 사용할 때는 특히 주의를 해야 합니다.

    2. Mixer sealing ring을 유기 용매에 저항성이 높은 제품(제품 코드: 29011326)으로 교체를 해야 합니다.

    3. Pump piston sealing도 변경하는 것이 좋습니다.  사용하는 Acetonitrile 농도 및 압력에 따라 다르지만 piston sealing의 수명을 연장하려면 더 낮은 농도의 Acetonitrile을 사용하고 사용 후에는 즉시 Acetonitrile을 제거해야 합니다.

    4. Fraction collector F9-C를 사용하여 가연성 액체를 분획하면 화재의 위험이 있습니다. 유기 용매를 사용하는 RPC 방법 또는 기타 절차를 실행할 때는 outlet valve 또는 Fraction collector F9-R (제품 코드: 29011362)을 사용하십시오.
  • 5ml Mixer chamber가 있는 ÄKTA Pure 150을 사용하고 있습니다. 직격 7cm의 column을 사용하려고 하는데 15ml Mixer chamber로 교체를 해야 하나요?
    Mixer chamber의 volume은 사용하시는 유속에 따라 다릅니다. 일반적으로 최대 50ml/min의 유속에는 5ml mixer를 사용하며 50ml/min 이상의 유속에서는 15ml mixer를 권장 드립니다. 이는 유속이 빨라짐에 따라 좀 더 정확한 gradient를 만들어 주기 위함입니다.

    따라서 column 에 충진되어 있는 resin에 따라 사용하는 유속을 고려하셔서 선택하시면 좋을 것 같습니다.
  • [ÄKTA avant] 에어 센서는 어디에 연결되어 있나요?
    인렛 밸브 A, 인렛 밸브 B, 샘플 밸브에 내장되어 있습니다.
  • [ÄKTA avant] 사용하는 유속에 따라 장착하는 믹서 챔버의 요량이 다른가요?
    기본으로 장착되어 있는 믹서 챔버는 1.4 ml (Avnat 25)와 5 ml (Avant 150) 입니다. 아래 표에 따라 해당하는 그래디언트 유속에 따라 믹서 챔버를 교체하세요.

    faq-ÄKTA avant
  • [ÄKTA avant] pH 전극을 사용하지 않을 때에도, pH 밸브의 플로우 셀에 삽입 한 채로 있어도 괜찮습니까?
    매일 사용하고 사용하지 않는 기간이 짧은 경우(야간 등)에는 pH 밸브에 연결 한 채로 있어도 괜찮습니다 (미사용시, pH 보정 모드로 전환, 실린지로 pH 플로우 셀 내에 보관용액을 충전해야합니다). 며칠 이상 사용하지 않을 경우는 pH 전극을 플로우 셀에서 분리, 보관용액을 충전 한 부속 보호 커버를 장착하여 저장하는 것이 좋습니다.
  • [ÄKTA avant] UV 플로우 셀의 cell length는 몇 mm 인가요?
    2 mm입니다. 더 감도를 높이고 싶은 경우 옵션의 5 mm 셀로 교체 가능합니다.
  • [ÄKTA avant] 역상 크로마토그래피가 가능한가요?
    가능하지만, fraction collector로의 collection이 불가능합니다. 휘발성 유기 용매가 fraction collector 내에 데미지를 줄 수 있어 분석용으로 사용하시거나 아웃렛 밸브로 collection 하실 수 있습니다.

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