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Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • ÄKTA start를 사용하여 viral 단백질을 정제할 수 있을까요?
    링크된 페이지를 통해, ÄKTA start를 사용한 viral 단백질 정제 방법을 확인해보세요.
  • Downstream에서의 Mechanistic modeling은 무엇인가요?


    Accelerate downstream process development with mechanistic modeling 영상을 통해 확인해보세요.

    또한 싸이티바 웨비나 허브에서 2022년 5월 진행된 스마트한 정제 공정 개발을 위한 새로운 전략적 접근 웨비나를 시청하여 Mechanistic modeling을 자세히 알아보실 수 있습니다.
  • 유사도 측정을 이용하여 단백질 공정의 최적화하는 방법은 어떤 것이 있나요?
    링크된 페이지를 참조하여 최적화하는 방법을 확인해보세요.
  • ÄKTA system의 component volumes은 어떻게 확인이 가능한가요?
    시스템 매뉴얼의 reference information 을 확인하시면 오른쪽 표에 해당내용이 있습니다. 이러한 component volumes은 Delay volume 을 setting 하실때 참고하시면 됩니다.
    component volumes
  • ÄKTA pure 150의 delay volume은 무엇인가요?
    • 보여지는 table의 delay volume는 U9-M을 기준으로 작성이 된 수치입니다.
    • 만약 U9-L을 사용하시는 경우라면, 2mm flow cell의 경우에는 9ul를 5mm flow cell을 사용하는 경우라면 4ul를 추가하시면 됩니다.
    AKTA pure 150 delay volume

    측정이 된 delay volumn을 system 에 적용하는 방법은 아래와 같습니다.

    Control 창에서, System settings  delay volume →monitor to outlet valve or monitor to fraction 선택 → Delay volume 입력 → ok
  • ÄKTA avant의 fraction collector 혹은 F9-C collector에서 cassette type을 인지하지 못하는 error가 발생하는데 어떻게 해결해야 하나요?
    Fraction collector 에는 cassette type을 인지할 수 있는 sensor가 내장되어 있습니다.

    이곳에 다른 이물질에 붙어 있게 되면 제대로 된 cassette를 인지하지 못하기 때문에, 일주일에 한 번은 sensor를 닦아주는 것이 좋습니다.
  • HPLC보다 AKTA를 사용해서 단백질 정제를 하였을 경우 어떠한 이점이 있을까요?
    ÄKTA 시스템은 다음 단계의 실험 혹은 제품을 위한 대량의 단백질 정제를 위한 장비로 분획을 받기 위한 정제 시스템입니다.

    AKTA는 내염성, 저유량,저압력 크로마토그래피 시스템으로 펌프와 버퍼의 이동경로, 유연성 및 자동화 기능이 단백질 정제에 최적화되어 있습니다. HPLC에서 사용되는 고압 조건은 분석용에 적합하며, 단백질의 구조에 영향을 줄 수도 있습니다.

    이러한 특징으로 인해 AKTA는 단백질 정제에 최적화 되어 있는 시스템입니다.
  • 크로마토그램에서 주어진 UV 흡광도로부터 단백질의 농도를 측정할 수 있을까요?
    네. 타겟 단백질의 흡광계수를 알고 있다면, UNICORN 7에서 간단하게 계산 할 수 있습니다.

    Evaluation 창에서 결과 파일을 더블 클릭 하시고 1번을 클릭해서 UV면적을 구합니다.

    그리고 2번의 흡광계수를 입력하시면, 단백질 농도와 함께 양을 확인 하실 수가 있습니다.

    AKTA_UNICORM
  • ÄKTA를 사용하지 않을 경우 어떻게 보관해야 할까요?
    아래 기간에 따른 ÄKTA 보관 방법을 참고하시기 바랍니다.

    <3일 이내 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • 아래의 Flow path를 모두 DW로 Washing (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • ÄKTA는 “Pause” 가 아니라 “End” 상태로 보관
    • ÄKTA와 UNICORN software는 shut down 할 필요는 없음
    <3일 이상 보관>
    • Column CIP 후 장비에서 제거
    • pump rinse solution을 fresh 20% EtOH로 교체
    • 미지근한 DW로 장비 전체를 Washing (manually or system wash) (pumps, tubing, flow cells, valves, sample loop, fraction collector, accumulator- ÄKTA avant and ÄKTA pure with an F9-C)
    • 장비 전체를 fresh 20% EtOH로 채움
    • pH probe는 storage buffer에 보관
    • UNICORN software를 끄고 PC-> ÄKTA system 순서로 Shut down 한다.
  • ÄKTA system을 이용해서 천연 물질에서 소수성 단백질을 분리하기 위해 RPC column을 사용하려고 합니다. Fraction collector는 FR-C를 가지고 있는데 주의하여야 할 사항이 있을까요?
    ÄKTA pure 25 크로마토그래피 시스템을 사용하여 역상 크로마토그래피를 수행하려면 따라야 할 몇 가지 중요한 지침이 있습니다.

    1. 유기 용매는 일반적으로 단백질 분리에 사용하는 버퍼 보다 ​​PEEK 튜브 벽을 더 쉽게 약화시킬 수 있습니다. 장기간 동안 높은 압력에서 유기 용매를 사용할 때는 특히 주의를 해야 합니다.

    2. Mixer sealing ring을 유기 용매에 저항성이 높은 제품(제품 코드: 29011326)으로 교체를 해야 합니다.

    3. Pump piston sealing도 변경하는 것이 좋습니다.  사용하는 Acetonitrile 농도 및 압력에 따라 다르지만 piston sealing의 수명을 연장하려면 더 낮은 농도의 Acetonitrile을 사용하고 사용 후에는 즉시 Acetonitrile을 제거해야 합니다.

    4. Fraction collector F9-C를 사용하여 가연성 액체를 분획하면 화재의 위험이 있습니다. 유기 용매를 사용하는 RPC 방법 또는 기타 절차를 실행할 때는 outlet valve 또는 Fraction collector F9-R (제품 코드: 29011362)을 사용하십시오.

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