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Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • [NEW] Q-Sepharose FF 컬럼을 장기 보관하려고 하는데 20% 에탄올이 아닌 다른 저장 용매를 찾고 있습니다. Isopropanol을 사용해도 괜찮을까요?
    Q-Sepharose FF에 대한 isopropanol의 장기 보관에 대한 연구가 없기 때문에 권장 드리지 못합니다. 그러나 benzyl alcohol에 대한 호환성은 검증이 된 용매이니 isopropanol이 아닌 benzyl alcohol을 권장 드립니다.

    이외 다른 크로마토그래피 레진에 대한 저장 용매는 각 제품의 Data File을 보면 확인이 가능합니다.
  • [NEW] Affinity tag의 종류와 정제 시 고려해야 하는 사항이 있을까요?
    단백질에 affinity tag을 추가하면 정제 및 검출이 비교적 쉬우며, target 단백질의 용해도와 안정성을 향상시킬 수 있습니다.

    Tag 선택 시 고려할 사항은 정제 목적, Tag 크기, 크로마토그래피 resin의 비용 등이 있습니다. 아래 표는 가장 많이 사용되는 4가지 Tag에 대한 주요 특징을 보여줍니다.

    His-tag은 단백질 정제에 일반적으로 가장 많이 사용하는 tag이며, binding capacity가 높은 반면 purity가 낮은 단점이 있습니다. Strep-tag는 purity는 높지만 binding capacity가 낮습니다. GST는 적절한 binding capacity와 purity를 가지고 있습니다.

  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] BufferPrep 기능을 사용하고 싶습니다 버퍼는 어떻게 준비하면 되나요?
    준비 용액은 사용할 버퍼, pH 적정용 HCl (또는 NaOH), NaCl solution, DW의 4 종류입니다. 별도의 pH 적정이 필요 없습니다. UNICORN 소프트웨어에서는 pH 범위에 해당하는 버퍼 조제법 (Recipe)이 포함되어 있습니다. 작업 표시 줄의 Method Editor를 클릭하여 Method 작성 창을 열고 "Edit"에서 "BufferPrep Recipes"를 선택하면 조제법을 볼 수 있습니다.
  • ÄKTA를 사용해서 정제할 때 유용한 connectors를 소개해 주세요.
    [ÄKTA Accessories 어플의 Fittings에서 더 많은 connectors를 확인하시기 바랍니다.

    atka_appatka_app_1
  • HiTrap column으로 정제할 때 사용하는 connectors를 소개해 주세요.
    AKTA Accessories 어플의 Fittings에서 더 많은 connectors를 확인하시기 바랍니다.

    atka_appatka_app_1
  • GST-tagged protein을 어떻게 정제할 수 있을까요?
    [GST-tagged Protein의 정제과정]

    [1] 정제도
    • PreScission Protease를 사용해서 GST-tagged proteins을 정제하는 방법
    gst2
    • Thrombin이나 Factor Xa을 사용해서 GST-tagged proteins을 정제하는 방법
    gst1 * 이미지 크게 보기

    [2] Cleavage enzyme에 따른 구분

    faq1

    더 자세한 내용은 자료실-Chromatography 페이지의 Affinity Chromatography vol.2 핸드북의 chapter 5를 참고하시기 바랍니다.
  • Sephadex resin을 어떻게 사용할 수 있는지 알려주세요.
    Cytiva 실험길라잡이 자료실 내 Chromatography 페이지의 [All about Sephadex 설명서]를 참고하세요.

    바로 가기
  • Buffer 가 부족하여, Column 이 완전히 Dry 되었습니다. Column 을 재 사용 할 수 있을까요?
    어떠한 종류의 Column도 Dry 되기 전의 Column Performance를 재현하기가 매우 힘듭니다. Gel filtration (GF) Column 의 경우, Packed Bed의 상태에 따라 크로마토그램의 분리능에 큰 영향을 주는 Chromatography column이기 때문에, 레진이 Dry 되면 Packed Bed에 Cracking을 형성 할 수 있어서, 재 기능을 잃을 수 있습니다. 그렇기 때문에, Re-Packing을 추천 드립니다. Cracking 의 형성은 또한, Ion Exchange chromatography (IEX)와 Affinity chromatography (AC) 에도 영향을 줍니다. 재 사용을 원하실 경우에는, 20% EtOH 을 이용하여, Column내의 공기를 최대한 제거를 해 주신 후, Column Packing Evaluation을 통하여 레진의 Quality 를 확인 하시는 것을 추천 드립니다. Adsorption chromatography (IEX, AC) 레진의 Dry는 Ligand 에 영향을 줄 가능성 또한 있어서, 사용하시기 전에, 샘플을 사용하여, Dry 전과 후의 크로마토그램 결과를 비교하는 과정이 필요합니다.
  • Chromatography Resin의 Matrix 별 최대 압력은 어떻게 다른가요?
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  • 레진의 유효기간은 어떻게 되나요?
    Cytiva에서 제공하는 레진 (resin)의 Expiry date란 사용하지 않은 레진을 기준으로 COA (Certificate of Analysis: 성적증명서)에 나온 기준값에 대해서 GE가 보증하는 기간을 의미합니다. 실제적으로 레진을 사용하실 때에는 이와는 별도로, 사용하는 정제 프로세스에 따라서 별도의 Lifetime study를 진행하셔서 최대로 사용할 수 있는 cycle을 검증해야 합니다. 이는 보통 Small scale에서 예측한 뒤에, Large scale에서 확인을 하는 방식으로 진행합니다. 각각의 타겟단백질과 불순물, 그리고 Cleaning 방식에 따라서 레진의 Lifetime은 달라지므로 고객이 직접 검증을 해주셔야 하며, GE에서는 각 레진마다 정제 프로세스 중에서 일반적으로 가장 가혹한 조건인 CIP (Cleaninig-in-Place)를 기준으로 해서 레진의 성능이 유지되는 기간을 조사하기도 합니다.

    BioProcess Chromatography media-Lifetime studies

    The lifetime of a chromatography media (resin) is dependent on the process where it is used. In-process materials such as product and other components are specific for each process. It is therefore important that lifetime investigation on the actual process is performed. Lifetime can be estimated in small scale cycling studies and later confirmed at manufacturing scale under a validation period.

    As part of GE Healthcare Life Sciences development program for new BioProcess chromatography media, lifetime investigations are performed. The intention of the investigations is to decide on a CIP(Cleaning in Place) protocol that can be recommended and to prove the media lifetime for a specified number of CIP-cycles. Exposure to a CIP-protocol for a number of cycles with or without feed sample is investigated. Results from lifetime investigations are presented in the Regulatory Support File of a product and can be used by GE Healthcare customers to design a CIP –protocol and determine the lifetime of the chromatography media in their specific process.

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