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Chromatography 관련 자주 묻는 질문과 그에 대한 답을 확인해보세요.

  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] 컬럼 없이 flow를 흘렸을 때 압력이 높습니다. (DW 실온, 1 m / min로 0.35MPa 이상이됩니다).
    시스템 part 혹은 튜빙 중 어디가 막혀 있을 수 있습니다. 각 연결부를 차례로 분리 및 압력을 체크하여 위치를 확인합니다. 주요 원인으로 온라인 필터(mixer 내 장착) 및 FR-902 에서 막힘이 있을 수 있고, 튜빙이 꺽임이나 밸브내 염이 침착되어 있을 수 있습니다.
  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] Fraction 설정에서 Peak fraction을 선택하여 UV 레벨 값을 설정했지만, 용출시 UV 레벨 값이 설정 값을 넘기고 있는데도 Fraction이 시작하지 않습
    1) Peak fraction은 설정 한 수준 (mAU)의 값을 넘어선 때부터 피크로 인식합니다. 이미 UV 레벨 값이 설정 한 값을 넘긴 상태에서 용출이 시작된 경우 피크 인식되지 않으므로 일단 Peek fraction에서 설정 한 값보다 UV 레벨 값이 내려갈 때까지 비 흡착 시료를 씻어내야합니다 .
    2) UV-900의 경우, 첫 번째 피크 값을 바탕으로 Peak fraction 합니다. 첫째 peak보다 제 2, 제 3 peak의 UV 레벨 값이 큰 경우는 1 peak의 값을 변경합니다.
  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] P-950 샘플 펌프를 사용하여 컬럼에 직접 자동 샘플 충전 (Sample Pump direct loading)을 할 경우 샘플의 손실은 어느 정도입니까?
    추천의 튜빙을 연결하는 경우에는 샘플 입구 관에서 분사 밸브까지 남아 샘플은 5 ml 정도입니다. 샘플의 손실을 피하기 위해 샘플 루프에 대한 샘플 작성은 수동 조작으로 할 것을 추천합니다.
  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] BufferPrep 기능을 사용하고 있습니다. pH의 실측 값이 설정 값과 크게 다른 건가요?
    BufferPrep 기능은 준비한 버퍼를 UNICORN 내장 프로그램에 따라 혼합하여 준비합니다 (pH 값은 모니터링만으로 pH 조정을 하지 않습니다.) 따라서 pH 적정 용액의 농도가 약간 다를뿐 실제 pH가 크게 변화 할 수 있습니다. 재현성을 얻기 위해 pH 적정 용액 (0.1 M HCl 등)은 농도 제조 된 시판품을 사용하는 것을 추천합니다.
  • [ÄKTAexplore / purifier / FPLC] BufferPrep 기능을 사용하고 싶습니다 버퍼는 어떻게 준비하면 되나요?
    준비 용액은 사용할 버퍼, pH 적정용 HCl (또는 NaOH), NaCl solution, DW의 4 종류입니다. 별도의 pH 적정이 필요 없습니다. UNICORN 소프트웨어에서는 pH 범위에 해당하는 버퍼 조제법 (Recipe)이 포함되어 있습니다. 작업 표시 줄의 Method Editor를 클릭하여 Method 작성 창을 열고 "Edit"에서 "BufferPrep Recipes"를 선택하면 조제법을 볼 수 있습니다.
  • ÄKTA를 사용해서 정제할 때 유용한 connectors를 소개해 주세요.
    [ÄKTA Accessories 어플의 Fittings에서 더 많은 connectors를 확인하시기 바랍니다.

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  • HiTrap column으로 정제할 때 사용하는 connectors를 소개해 주세요.
    AKTA Accessories 어플의 Fittings에서 더 많은 connectors를 확인하시기 바랍니다.

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  • GST-tagged protein을 어떻게 정제할 수 있을까요?
    [GST-tagged Protein의 정제과정]

    [1] 정제도
    • PreScission Protease를 사용해서 GST-tagged proteins을 정제하는 방법
    gst2
    • Thrombin이나 Factor Xa을 사용해서 GST-tagged proteins을 정제하는 방법
    gst1 * 이미지 크게 보기

    [2] Cleavage enzyme에 따른 구분

    faq1

    더 자세한 내용은 자료실-Chromatography 페이지의 Affinity Chromatography vol.2 핸드북의 chapter 5를 참고하시기 바랍니다.
  • Sephadex resin을 어떻게 사용할 수 있는지 알려주세요.
    Cytiva 실험길라잡이 자료실 내 Chromatography 페이지의 [All about Sephadex 설명서]를 참고하세요.

    바로 가기
  • Buffer 가 부족하여, Column 이 완전히 Dry 되었습니다. Column 을 재 사용 할 수 있을까요?
    어떠한 종류의 Column도 Dry 되기 전의 Column Performance를 재현하기가 매우 힘듭니다. Gel filtration (GF) Column 의 경우, Packed Bed의 상태에 따라 크로마토그램의 분리능에 큰 영향을 주는 Chromatography column이기 때문에, 레진이 Dry 되면 Packed Bed에 Cracking을 형성 할 수 있어서, 재 기능을 잃을 수 있습니다. 그렇기 때문에, Re-Packing을 추천 드립니다. Cracking 의 형성은 또한, Ion Exchange chromatography (IEX)와 Affinity chromatography (AC) 에도 영향을 줍니다. 재 사용을 원하실 경우에는, 20% EtOH 을 이용하여, Column내의 공기를 최대한 제거를 해 주신 후, Column Packing Evaluation을 통하여 레진의 Quality 를 확인 하시는 것을 추천 드립니다. Adsorption chromatography (IEX, AC) 레진의 Dry는 Ligand 에 영향을 줄 가능성 또한 있어서, 사용하시기 전에, 샘플을 사용하여, Dry 전과 후의 크로마토그램 결과를 비교하는 과정이 필요합니다.

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