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AC는 단백질(혹은 단백질 집단)과 크로마토그래피 매트릭스에 부착된 특이 리간드 간의 가역적인 상호작용을 기초로 하여 단백질을 분리합니다. 적합한 리간드가 사용 가능하다면 언제든지 AC를 이용할 수 있습니다. 표적 단백질은 상보적 결합 물질(리간드)에 특이적, 가역적으로 부착합니다. 시료는 특이적 결합이 잘 일어나는 조건 하에 적용됩니다. 결합되지 않은 물질은 씻겨 내려가고 결합된 표적 단백질은 탈착이 잘 일어나는 조건으로 바꾸어 줌으로써 회수됩니다. 탈착은 경쟁적 리간드를 이용하여 특이적으로 이루어지거나 pH, 이온 강도 혹은 극성을 변화시켜 비특이적으로 탈착이 일어나게 합니다. 결합하는 동안 농축된 단백질은 정제되고 농축된 형태로 회수됩니다. 분리의 주요 단계들이 아래 그림에 나와 있습니다.

Affinity img

시료의 양과 용량
총 결합 용량(결합된 표적 단백질/㎖ 매질)은 상업적으로 유용한 친화성 매질에 한정됩니다. AC는 시료의 양에 구애받지 않는 결합 방법입니다.

컬럼의 선택
친화성 레진의 상업적 유용성을 고려해야 합니다. 특이적 친화성 레진은 추천되는 결합(coupling) 과정에 따라 선택된 겔 매트릭스에 리간드를 결합시켜 만들어집니다. AC에 대한 보다 자세한 사항은 아래 레진 선택 가이드와 Operation 관련 자료의 ‘Prepacked chromatography columns for ÄKTA systems’에 나와 있습니다. 실험 방법을 최적화하거나 규모가 작은 정제를 위해 pre-packed column인 HiTrap Affinity 컬럼을 이용하세요.

시료 조제
시료는 비특이적으로 컬럼에 결합할 수 있는 입자상 물질(미세 먼지)과 오염물질이 없어야 합니다.

버퍼 조제
결합, 용출 그리고 재생 버퍼는 각각의 레진마다 다릅니다. 제공된 설명서를 따르도록 합니다.

Operation 관련 자료

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