fbpx

겔 여과는 분자 크기의 차이에 따라 단백질을 분리합니다. 이 방법은 시료의 양이 최소화될 때 사용해야 합니다. 버퍼 조성이 용리에 직접적인 영향을 주지 않으므로 시료의 형태 혹은 다음 정제, 분석, 혹은 보관 단계를 위한 요구 조건을 맞추기 위해 버퍼 조건을 변화시킬 수 있습니다. 분리의 주요 단계가 아래 그림에 나와 있습니다.

GF (SEC) img

시료의 양과 용량
가장 높은 용리를 얻기 위해 시료의 양은 총 컬럼 부피의 5%를 넘지 않아야 합니다. 겔 여과는 시료의 농도와 관계가 없습니다.

컬럼의 선택
Gel Filtration Selection Guide(Code: 18-1124-19)를 참고하세요. 겔 여과에서 효율적인 컬럼 패킹은 필수적입니다. 재현 가능한 결과와 효율적인 수행을 위해 미리 Pre-packed 컬럼을 사용하도록 합니다.

시료 조제
시료 내에 입자상 물질(미세 먼지)이 없어야 합니다. 점성이 있는 시료는 희석해야 합니다. 분리하는 동안 시료 버퍼는 컬럼 내 버퍼으로 교환됩니다.

버퍼 조제
정제된 산물이 회수될 버퍼을 선택합니다. 버퍼는 단백질 안정성과 활성에 적합해야 합니다. 이온 강도는 매트릭스와의 비특이성 이온 상호작용을 막기 위해 150 mM까지 사용할 수 있습니다. 새로운 시료로 작업할 때 다음과 같은 조건을 먼저 시도해봅니다.

집단 분리
Sephadex™ G-25는 시료 조제와 정화를 위해 탈염, 버퍼 교환, 그리고 지질을 제거하는 데에 사용하고, Mr이 5000을 초과하는 단백질부터는 염을 이용합니다. 또한 겔 여과는 정제 단계 전이나 사이의 시료 조제에 이상적입니다. 총 컬럼 부피의 30%까지 시료를 주입합니다. 단 한 개의 과정으로 시료를 탈염하고 새로운 버퍼으로 교환하며, 분자량이 낮은 물질을 제거합니다.
시료의 양이 많든 적든 빠르고 효율적으로 처리할 수 있습니다. 많은 양의 시료를 주입하면 용리 분리가 낮으나 시료가 최소한으로 희석됩니다.

Operation 관련 자료

Share This